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这种才是C18色谱柱正确的使用方法
这种才是C18色谱柱正确的使用方法
更新时间：2022-09-26 点击次数：1527
C18色谱柱根据极性分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN、-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还C8、C4、C2和苯基柱等。
C18色谱柱的构造：
由柱管、压帽、卡套、筛板、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。
色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出，柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。
C18色谱柱的使用方法：
1、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
2、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
3、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用之前需用100%的甲醇以0.5~1.0的流速平衡30min左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用100%的纯甲醇以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇保存。
4、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前需用10%的甲醇水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将新柱高浓度甲醇溶液*置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液*置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
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